Tác dụng chống huyết khối và tiêu sợi huyết của NKCP (Protein từ Bacillus subtilis natto)

Bacillus subtilis natto là gì?

Bacillus subtilis natto là một loại vi khuẩn được phân lập từ thực phẩm Natto, món ăn truyền thống của đất nước Nhật bản được làm từ đậu nành lên men. Nó nằm trong phần các sợi tơ trắng bao quanh hạt đậu tương trong món Natto.

Bacillus subtilis natto bài tiết ra khoảng gần 200 loại protease sau khi kết thúc quá trình lên men đậu tương. Một số loại trong chúng được báo cáo có tác dụng tiêu sợi huyết nhưng chưa có một nghiên cứu nào đánh giá tác dụng chống huyết khối.

Một phân đoạn chiết từ Bacillus subtilis natto chứa một lớp protein tinh khiết, được đặt với tên là NKCP của tập đoàn Daiwa Pharmaceutical Corp., Nhật Bản, đã loại bỏ phần lớn Vitamin K2. Trước đây, NKCP đã được quan sát thấy tác dụng tiêu sợ huyết thông qua giảm thời gian ly giải eugloburin (Euglobulin lysis time test) trong máu người trong 2 nghiên cứu lâm sàng trên 28 tình nguyện viên khỏe mạnh trong 2 tuần và 23 người trong vài tuần.

Xem thêm: Giới thiệu nguyên liệu NKCP

Tuy nhiên vai trò và cơ chế hoạt động của NKCP với hệ thống đông máu vẫn chưa rõ ràng. Nghiên cứu dưới đây thực hiện để làm rõ tác động này của NKCP.

Xác định thành phần chính của NKCP

Phần tơ trắng khi lên men Natto được tinh chế bằng phương pháp ly tâm và lọc loại bỏ các phân tử có kích thước nhỏ, thu được 1 lớp protein phía trên. Phân đoạn này được chuyển thành dạng bột sau đó sấy khô, loại bỏ nước.

Qua phân tích trình tự các Acid amin, NKCP được xác định là phân đoạn có chứa Protein có trọng lượng phân tử 34.134 dalton, là một protease serine ngoại bào được tiết ra bởi B. subtilis sau giai đoạn tăng trưởng tế bào là bacillopeptidase F.

Tác dụng tiêu sợi huyết của NKCP

Tác dụng tiêu sợi huyết của NKCP được quan sát thông qua sự phân hủy cục máu đông trong ống nghiệm. Cục máu đông nhân tạo được tạo ra bằng cách đông máu tự nhiên trong ống nghiệm, sử dụng máu từ các tình nguyện viên nam trẻ khỏe mạnh.

Sau 1 giờ, cục máu đông nhân tạo được rửa sạch nhiều lần trước khi nhúng vào 2 dung dịch: dung dịch NKCP 0,1 mg / mL và dung dịch đối chứng là nước muối sinh lý, để ở nhiệt độ phòng và quan sát sau 30 phút, 60 phút, 180 phút.

Sự phân hủy cục máu đông được quan sát thấy trong ống nghiệm có chứa NKCP với sự lan rộng của các tế bào hồng thoát ra khỏi lưới fibrin từ cục máu đông tạo ra dịch dịch màu đỏ và có sự giảm kích thước cục máu đông hơn so với ống đối chứng.

Hoạt tính serine protease

Hoạt tính serine protease là hoạt tính của enzyme có khả năng cắt các mối liên kết peptide, với đặc trưng là có phân tử serine nằm trong trung tâm xúc tác phản ứng của enzyme. 

Bằng phương pháp định lượng đo hoạt tính serine Elisa, kết quả hoạt tính protease là 1800 unit/g của NKCP, tương đương với 11,1 unit trong 239.9mcg của bacillopeptidase F.

Tác dụng chống huyết khối

Tác dụng chống huyết khối của NKCP được đánh giá trên chuột đực 8 tuần tuổi. Sau khi những con chuột được gây mê, một ống thông polyethylene dài 10 cm có vòng lặp được đưa vào động mạch chủ bụng để gây huyết khối gây tổn thương nội mô và rối loạn lưu lượng máu.

Chuột được chia thành nhiều nhóm, mỗi nhóm 6 con.

•  Nhóm đối chứng: sử dụng nước muối sinh lý
• Nhóm được điều trị với thuốc chống huyết khối Wafarin
• Nhóm điều trị với NKCP với 4 mức liều: 5mg; 25mg; 100mg; 125mg/kg

Sau 6h tiêm, lấy máu các con chuột đánh giá trên 2 chỉ số:

Xét nghiệm (PT) prothrombin: Khảo sát con đường đông máu ngoại sinh.

Xét nghiệm APTT thromboplastin: đánh giá con đường đông máu nội sinh.

Cho kết quả:

Chỉ số PT cao hơn đáng kể so với đối chứng với liều 5 mg / kg trở lên và APTT lớn hơn đáng kể so với đối chứng với liều 25 mg / kg trở lên (P <0,05), mức thay đổi này phụ thuộc vào liều dùng.

Kết luận

NKCP có tác dụng tiêu sợi huyết thông qua hoạt tính enzyme serine protease có khả năng cắt fibrin.

Ngoài ra, quá trình tiêu sợi huyết của NKCP cũng được kích hoạt thông qua cơ chế điều hòa quá trình đông máu. Nghiên cứu trên chuột cho thấy NKCP tác động lên hệ thống đông máu thông qua 2 chỉ số xét nghiệm PT và APTT. NKCP ức chế hình thành huyết khối bằng cách làm tăng cả 2 chỉ số này khi được tiêm trực tiếp vào tá tràng của chuột, đây là 2 chỉ số đánh giá con đường đông máu ngoại sinh và nội sinh.

Bởi vì cả con đường đông máu bên ngoài và bên trong đều bị ức chế với NKCP theo cách tương ứng phụ thuộc vào liều lượng, tác dụng chống huyết khối không phải là tác dụng phụ sau tác dụng tiêu sợi huyết quá mức.

Tham khảo:

Nghiên cứu "A newly derived protein from Bacillus subtilis natto with both antithrombotic and fibrinolytic effects"

Thông tin chi tiết vui lòng liên hệ:

Công ty TNHH Dược Phẩm Nasol Quốc Tế

Hotline: 0387 368 760

Email: info@nasol.com.vn      Web: nasol.com.vn